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tm值怎么计算

公式:(GC)%=(Tm-69.3)*2.44 在一定条件下(pH7.0,0.165MNaCl中)Tm值与(GC)%含量呈正比关系.因此,通过测定Tm值,可以推算出DNA分子中的碱基百分组成.在一定条件下Tm高低由DNA分子中的G-C含量所决定.G-C含量

引物长度,碱基组成,引物使用缓冲的离子强度有关.长度为25mer以下的引物,Tm计算公式为:Tm = 4℃(G + C)+ 2℃(A + T)对于更长的寡聚核苷酸,Tm计算公式为:Tm = 81.5 + 16.6 x Log10[Na+] + 0.41 (%GC) 600/size 公式中,Size = 引物长度.用Primer5.0,DNA MAN,DNA STAR都可以算,我从来没自己算过.

Tm值就是DNA熔解温度,指把DNA的双螺旋结构在热变性过程中紫外吸收值达到最大值的1/2时的温度.不同序列的DNA,Tm值不同.DNA中G-C含量越高,Tm值越高,成正比关系.核酸Tm值(解链温度)计算 评价标准是核酸所吸收的光线量

Tm值的估算 1 <20bp Tm=4(G+C)+2(A+T) 2 >20bp Tm=69.3+0.41(G+C)% 3 Tm=81.5℃+16.6lgM+0.41(G+C)%-500/n-0.61*(甲酰胺%)

<p>Tm(解链温度)是指50%双链被解开成单链时的温度.寡核苷酸浓度和盐浓度会影响Tm值的大小.</p> <p>Tm 值 有 多 种 计 算 方 法 .我 们 使 用 近 邻 法 ( P N A S 8 3 ,3 7 4 6- 5 0 )来计算.用这种方法计算前,也有多种方法来估测.

引物设计软件都可以给出Tm,引物长度,碱基组成,引物使用缓冲的离子强度有关.长度为25mer以下的引物,Tm计算公式为:Tm = 4℃(G + C)+ 2℃(A + T) 对于更长的寡聚核苷酸,Tm计算公式为:Tm = 81.5 + 16.6 x Log10[Na+] + 0.41 (%GC) 600/size 公式中,Size = 引物长度.

单从公式上理解的话,(G+C)%应该等于10%吧,还有69.3带回去两边不等啊,仅供参考啊.

引物TM是设值和合成引物时的Tm值,也就是理论值.而PCR产物tm值是在实际操作中摸索出来的温度值 引物Tm值与PCR产物Tm值这两个不同的引物当然退火温度也不相同,一般在设计引物的时候,程序就会显示出Tm值是多少.在做PCR的时候,将退火温度设定的稍微低于Tm值一点,降低引物的特异性,可能会好点.当然,做PCR有一定的运气成分,同样的条件有时能扩出基因来,有时候却不能.一般来说,一直无法P出基因的话,首先就要检查引物设计是否有问题,如果没有问题,或者以前P出来过.那么检查下退火温度,多试几个温度.再就是Mg离子的浓度,模板不要太多.多尝试一下.总之,设定退火温度的时候略微比Tm低一点,适当的调整,多多尝试,就好了.

1.一般来说,较低的退火温度可以提高pcr反应的敏感性但特异性较差;而较高的退火温度则可以提高pcr的特异性但却降低了扩增效率.通常引物与模板的退火温度在45-55度.2.优化退火温度最好的方法是设置一系列对照反应,即通过在低于计算出的引物tm值2-10度的温度范围内,进行退火的一系列平行反应来确定最佳退火温度.也可以通过touch down pcr来设定退火温度,得到最佳退火温度.

负责引物合成的公司会给你引物的详细信息,其中有理论Tm值,应该是和这个公式Tm=2*(A+T)+4*(G+C) 计算的一样,你在进行调整优化即可.

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