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扩增产物的tm

这个要看你的实验目的了,你可以根据引物设计时给出的退火温度前后各十度做个温度pcr,然后选择能扩出带的温度.如果二聚体对实验影响较大的话则建议你换引物吧.

引物tm是设值和合成引物时的tm值,也就是理论值.而pcr产物tm值是在实际操作中摸索出来的温度值引物tm值与pcr产物tm值这两个不同的引物当然退火温度也不相同,一般在设计引物的时候,程序就会显示出tm值是多少.在做pcr的时候,将退火温度设定的稍微低于tm值一点,降低引物的特异性,可能会好点.当然,做pcr有一定的运气成分,同样的条件有时能扩出基因来,有时候却不能.一般来说,一直无法p出基因的话,首先就要检查引物设计是否有问题,如果没有问题,或者以前p出来过.那么检查下退火温度,多试几个温度.再就是mg离子的浓度,模板不要太多.多尝试一下.总之,设定退火温度的时候略微比tm低一点,适当的调整,多多尝试,就好了.

引物TM是设值和合成引物时的Tm值,也就是理论值.而PCR产物tm值是在实际操作中摸索出来的温度值 引物Tm值与PCR产物Tm值这两个不同的引物当然退火温度也不相同,一般在设计引物的时候,程序就会显示出Tm值是多少.在做PCR的时候,将退火温度设定的稍微低于Tm值一点,降低引物的特异性,可能会好点.当然,做PCR有一定的运气成分,同样的条件有时能扩出基因来,有时候却不能.一般来说,一直无法P出基因的话,首先就要检查引物设计是否有问题,如果没有问题,或者以前P出来过.那么检查下退火温度,多试几个温度.再就是Mg离子的浓度,模板不要太多.多尝试一下.总之,设定退火温度的时候略微比Tm低一点,适当的调整,多多尝试,就好了.

Tm较低,而且熔解温度范围较宽;离子强度较高时,Tm较高,熔解温度范围较窄.DNA溶液中离子强度低时,Tm较低,而且熔解温度范围较宽;离子强度较高时,Tm较高,熔解温度范围较窄.因此,在表示某一来源DNA的Tm值时,必须指出

<p>Tm(解链温度)是指50%双链被解开成单链时的温度.寡核苷酸浓度和盐浓度会影响Tm值的大小.</p> <p>Tm 值 有 多 种 计 算 方 法 .我 们 使 用 近 邻 法 ( P N A S 8 3 ,3 7 4 6- 5 0 )来计算.用这种方法计算前,也有多种方法来估测.

负责引物合成的公司会给你引物的详细信息,其中有理论Tm值,应该是和这个公式Tm=2*(A+T)+4*(G+C) 计算的一样,你在进行调整优化即可.

知道引物怎么确定pcr产物的长度1、引物长度一般为15-30bp,常用的为18-27bp,但不能大于38bp; 2、引物gc含量一般为40%-60%,以45-55%为宜,上下游引物gc含量和tm值要保持接近; 3、引物所对应的模板序列的tm值最好在72℃左右,至少要在55-80℃之间,tm值曲线以选取72度附近为佳.pcr是扩增数目的. 目的基因有700多,扩增产物长度只有200. 这个就是引物选择的问题了.引物决定了扩增的起始位置,如果你选择的引物正好是500以后的位置,那么扩增产物长度就只有200了.

该方法是将PCR扩增的产物量一中性聚丙烯酰胺凝胶上,在一温度线性梯度上升的电场中进行电泳,当DNA双链到达其Tm时,双链解开,形成分叉,而影响电泳迁移率,突变的扩增产物其Tm值与野先型有明显不同,因而有不同的解链区,从而造成电 泳迁移效率的差别,据此可判断检材中DNA有无突变.

PCR是扩增数目的.目的基因有700多,扩增产物长度只有200. 这个就是引物选择的问题了.引物决定了扩增的起始位置,如果你选择的引物正好是500以后的位置,那么扩增产物长度就只有200了.

引物设计软件都可以给出Tm,引物长度,碱基组成,引物使用缓冲的离子强度有关.长度为25mer以下的引物,Tm计算公式为:Tm = 4℃(G + C)+ 2℃(A + T)对于更长的寡聚核苷酸,Tm计算公式为:Tm = 81.5 + 16.6 x Log10[Na+] + 0.41 (%GC) 600/size 公式中,Size = 引物长度.

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